Aquí se presenta la primera
secuencia completa y la caracterización biológica de un virus de la enfermedad
de Newcastle (NDV) aislado de un pavo real en Sudamérica
(NDV/peacock/Peru/2011). Este aislado, clasificado como genotipo XII en la
clase II, resalta la necesidad de incrementar la vigilancia de especies de aves
no comerciales.
El virus de la enfermedad de Newcastle (NDV) es capaz de
infectar a >250 especies de aves en todo el mundo, también es responsable de
una enfermedad respiratoria aguda y muy contagiosa. NDV (géneroAvulavirus, familia Paramixoviridae)
posee un genoma ARN de cadena simple con polaridad negativa. Las aves
silvestres han sido implicadas en la propagación de la enfermedad a aves
domésticas (1). Basados en el análisis de la secuencia del gen de la proteína
de fusión (F), las cepas de NDV se clasifican en clase I o II. Las cepas de
clase I no son virulentas en pollos, mientras que las cepas de clase II pueden
ser lentogénicas, mesogénicas o velogénicas. La clase II se subdivide en al menos
18 genotipos del I al XVIII (2). Varios brotes han sido observados en el Perú
en los últimos años, pero la información con respecto a qué genotipos están
circulando es escasa.
En 2011, 9 de 10 pavos reales (Pavo cristatus) murieron
en una granja zoológico de Huachipa (Lima, Perú) con síntomas nerviosos y
respiratorios. El aislamiento del virus, a partir de hisopados orales y
cloacales, se realizó en huevos embrionados libres de patógenos específicos
(SPF) de nueve días de edad. El líquido alantoideo (AF) se colectó y evaluó por
hemaglutinación, y la prueba de inhibición de la hemaglutinación utilizando
suero hiperinmune contra NDV. El AF amplificado se aclaró, alicuotó, almacenó a
-80°C, y fue cuantificado mediante ensayo en placa. La dosis letal media (LD50)
se calculó en pollos SPF de cuatro semanas de edad, por diluciones seriadas de
10 en 10. El índice de patogenicidad intracerebral (IPIC) se calculó de acuerdo
con protocolos estándar (3). Todos los protocolos que incluían animales fueron
aprobados por el Comité Institucional para el Cuidado y empleo de Animales de
la Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) (Lima, Perú). La secuencia
completa de NDV/peacock/Peru/2011 se amplificó por ocho pares de cebadores de
oligonucleótidos sobrelapantes utilizando el kit OneStep reverse
transcription-PCR (RT-PCR) (Qiagen). Los amplicones purificados se clonaron en
el plásmido pGEM-T Easy (Promega) y se secuenciaron con los cebadores T7/SP6.
El ensamblaje y el alineamiento fueron hechos en SnapGene y Clustal W,
respectivamente.
El análisis filogenético y la comparación de secuencias
se realizaron en MEGA 6.0. El análisis de secuencia mostró que el genoma de
NDV/peacock/Peru/2011 es de 15,192 nucleótidos (nt) de longitud, con una
inserción de 6 nt (CTCCAC) después de la posición 1647 en la región 5’ no
codificante del gen de la nucleoproteína, comparado con la cepa LaSota (GenBank
no. AF077761.1). El análisis filogenético de la región codificante completa del
gen F coloca el aislado dentro genotipo XII en la clase II, junto con la cepa
poultry/Peru/1918-03/2008 (GenBank no. JN800306.1), que fue anteriormente
también aislada en el Perú (4). Una comparación de las secuencias del genoma
completo mostró que la identidad genética más alta (98.7%) se observó con poultry/Peru/1918-03/2008,
mientras que sólo el 82,1% se observó con la cepa LaSota.
Una comparación entre la LD50 (106.72/ml) y el número de
Unidades Formadoras de Placas (UFC) reveló al menos 2 x 102 UFC por pollo son necesarios para
matar al 100% (5/5 pollos), y 20 UFC son capaces de matar a 60% (3/5 pollos).
El aislado mostró un IPIC de 1.80, característico de cepas NDV velogénicas.
Estas características son consistentes con la presencia de un motivo de
aminoácidos polibásicos (112RRQKR↓F117) en el sitio de clivaje
de la proteína de fusión, que se considera un determinante molecular de
virulencia para NDV (5).
La dilucidación de la secuencia completa del genoma de
NDV/peacock/Peru/2011 nos ayudará a estudiar más a fondo la epidemiología y
patogénesis molecular del genotipo XII y ayudará en el desarrollo de una vacuna
candidata contra genotipos homólogos que están circulando en el Perú.
La secuencia completa del genoma de NDV/peacock/Peru/2011
se ha depositado en el GenBank bajo el número de acceso KR732614.
Agradecimientos
Este trabajo fue parcialmente financiado por el Programa
de Ciencia y Tecnología del Perú (FINCyT), contrato
140-FINCYT-FIDECOM-PIPEI-2012.
Referencias
1. Alexander DJ. 2000. Newcastle disease and other avian
paramyxoviruses. Rev Sci Tech 19:443–462.
2. Snoeck CJ, Owoade AA, Couacy-Hymann E, Alkali BR,
Okwen MP, Adeyanju AT, Komoyo GF, Nakouné E, Le Faou A, Muller CP. 2013. High
genetic diversity of Newcastle disease virus in poultry in West and Central
Africa: cocirculation of genotype XIV and newly defined genotypes XVII and
XVIII. J Clin Microbiol 51:2250–2260. doi:.10.1128/JCM.00684-13.
3. Office Internationale des Epizooties. 2012. Manual of
diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals, 7th ed. Office
Internationale des Epizooties, Paris, France.
4. Diel DG, Susta L, Cardenas Garcia S, Killian ML,
Brown CC, Miller PJ, Afonso CL. 2012. Complete genome and clinicopathological
characterization of a virulent Newcastle disease virus isolate from South
America. J Clin Microbiol 50:378–387. doi:.10.1128/JCM.06018-11.
5. Peeters BP, de Leeuw OS, Koch G, Gielkens AL. 1999.
Rescue of Newcastle disease virus from cloned cDNA: evidence that cleavability
of the fusion protein is a major determinant for virulence. J
Virol 73:5001–5009.
Aviso
Este documento es una traducción no oficial hecha por
FARVET S.A.C. con el objetivo de facilitar la información a personas de habla
hispana. La traducción está basada en el documento original
"Characterization and Sequencing of a Genotype XII Newcastle Disease Virus
Isolated from a Peacock (Pavo
cristatus) in Peru" de la revista Genome Announcements
3(4):e00792-15. doi:10.1128/genomeA.00792-15. El artículo original se encuentra
en el siguiente link:
